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0 人阅读发布时间:2026-11-02 13:47

Cleavage Under Target & Tagmentation(CUT&Tag) 是一种新兴的DNA- 蛋白质互作研究方法。CUT&Tag 以融合了Protein A/G 的转座酶为核心,融合蛋白通过Protein A/G与抗体结合,使得转座酶被栓系在靶位点周围,从而在目的位点附近进行酶切反应,并同时引入二代测序所必需的接头序列,产物DNA 经过后续提取与PCR 扩增后得到文库,可直接用于高通量测序。
01
技术原理


细胞被固定在刀豆蛋白磁珠(ConA 磁珠)表面,然后加入洋地黄皂苷(Digitonin)透化细胞膜,依次进行一抗、二抗、转座体的孵育及片段化,反应产物经过DNA 提取、PCR 富集完成二代测序文库的构建。对于人源细胞常规的组蛋白修饰,仅需进行3-5M reads的测序量就能得到高分辨率的全基因组图谱。
02
技术优势
▪ 信噪比高
CUT&Tag有更低的背景,更强的信号。

▪ 分辨率高
相同测序深度,CUT&Tag获取的Peak数高

03
应用方向
▪组蛋白修饰:无论是常染色质还是异染色质,都可以利用CUT&Tag技术进行探索组蛋白修饰情况。
▪转录因子:转录因子按照CUT&Tag正常实验推荐的细胞量即可进行实验。
▪全基因组结合蛋白:除了组蛋白和转录因子外,基因组上其他结合蛋白同样适用CUT&Tag技术。
▪标签蛋白:若DNA结合蛋白找不到合适的抗体时,可以将靶蛋白和标签核酸序列连接一起,转基因表达。用抗标签抗体进行试验。
▪间接结合蛋白:有些蛋白并不直接结合DNA,而是与直接结合DNA的蛋白结合,同样可以进行CUT&Tag实验。
▪R-Loop结构:R-Loop结构为DNA和RNA杂交链,没有靶蛋白结合。但是有特异性抗体识别,同样可以进行CUT&Tag实验。
04
已验证抗体清单

所需抗体若为非列表内,需提供抗体名称、货号、物种等信息进行评估,且需自行提供
